EGFRvIII et de membres pro-apoptotiques basket blanche femme puma de la famille de protéines Bcl-2. Comme le montre la figure 1a, la majorité de ces lignées cellulaires co-expriment des taux élevés d'EGFR et de trois protéines pro-apoptotiques, à savoir PUMA, Bax et Bmf. En revanche, ces cellules expriment de faibles niveaux de Bad, Bim et Bok. Pour déterminer si EGFRvIII coexprimait également avec des protéines pro-apoptotiques similaires à l'EGFR, nous avons examiné trois xénogreffes de GBM portant l'EGFRvIII.

L'a-tubuline a été déterminée en tant que témoin de charge. Lignées cellulaires: 1, UW14; 2, UW281; 3, MGR1; 4, MGR2; 5, MGR3; 6, T98G; 7, U373MG; 8, UW5; 9, UW15; 10, UW19. Toutes sont des cellules GBM, à l'exception de MGR1 et UW5, basket femme puma noir qui sont des cellules AA. (B) Co-expression de EGFRvIII et de protéines pro-apoptotiques dans des xénogreffes de GBM. Trois xénogreffes de GBM exprimant EGFRvIII, à savoir, D-270 MG, D-317 MG et U87MG-EGFRvIII, ont été examinées pour déterminer les basket femme puma pas cher niveaux de EGFRvIII.

Et D-317 MG) et avec EGFRvIII transfecté de manière stable . De manière similaire, dans trois lignées de GBM exprimant EGFR, il a été démontré que PUMA co-immunoprécipitait avec EGFR (Fig. 1d). Les IgG n'ont pas donné de signaux indiquant une spécificité d'immunoprécipitation. L'interaction EGFR-PUMA a été confirmée par IP inverse en utilisant un anticorps PUMA (Un rapport précédent avait montré que l'EGFR pouvait exister dans le cytoplasme sous une forme libre non liée à basket homme puma la membrane.

Conformément aux résultats de la figure S1, il a été constaté qu'une sous-population de GBM exprimait PUMA, mais pas des niveaux substantiels d'EGFR / EGFRvIII.EGFR / EGFRvIII et PUMA co-expriment dans des échantillons primaires de GBM et l'étendue de la co-expression est significativement corrélée au degré de gliome. de manière significative avec PUMA dans les GBM primaires. Une cohorte de 101 gliomes et 12 tissus cérébraux normaux a été soumise à une coloration IHC pour EGFR / EGFRvIII et PUMA.

L'anticorps EGFR utilisé dans ces études reconnaissait à la fois l'EGFR et l'EGFRvIII. L'analyse de régression a montré que l'expression de l'EGFR est corrélée de manière significative et positive avec PUMA (p = 0,039, R = 0,9) et que l'EGFR seul, PUMA seul et leur co-expression étaient en corrélation significative basket noir femme puma et positive avec le degré de gliome (* EGFR / PUMA, p = 0,018 , R = 0,94; ** EGFR, p = 0,00005, R = 1,0; *** PUMA, p = 0,021, R = 0,93). (B) Gliomes primaires immunocolorés représentatifs.

Comme le montre la figure 3a, le test TUNEL a montré que l'inactivation de PUMA rend les cellules U87MG résistantes à l'apoptose (2,5%), induites par des traitements à l'anisomycine pendant 48 heures. En revanche, les cellules U87MG transfectées avec l'ARNsi contrôle subissent une apoptose significative induite par l'anisomycine (45,5%). Dans l  analyse, les signaux jaunes fusionnés représentent l ADN fragm analyse, les signaux jaunes fusionnés représentent l ADN fragmenté nucléaire.